PCR en análisis de ADN
Los departamentos de policía, los fiscales y los laboratorios delictivos de todo el mundo han aprovechado el poder de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para ayudar en la investigación de las escenas del crimen. La PCR ayuda a construir perfiles de ADN, que sirven como"código de barras" único para cada individuo, lo que hace de este uno de los grandes casos en los que la biología y la tecnología se fusionan para resolver problemas sociales.
¿CÓMO SOMOS DIFERENTES?
Una vez finalizado el Proyecto Genoma Humano, se ha determinado que el genoma está compuesto por aproximadamente 3 millones de bases. De estos, ~ 99,5% son idénticos en todos los seres humanos, lo que implica que no somos tan diferentes después de todo.
Se revela que la variación que observamos que hace que cada uno de nosotros parezca único se debe principalmente a diferencias en el número de secuencias repetidas para regiones particulares del genoma. De estas regiones, se ha identificado la repetición en tándem corta (STR) y es la repetición más utilizada (con 13 loci o regiones) en la aplicación actual.
PERFILES DE ADN A TRAVÉS DE STR
STR se compone de bases repetidas de 3-4 nucleótidos que se encuentran en diferentes loci en el genoma humano. Cada individuo hereda dos copias, o alelos de sus padres, por lo tanto, se podría construir un perfil STR.
Para diferentes poblaciones, se han utilizado varios loci como estándar en la identificación de individuos. Para hacer coincidir los perfiles de STR, los números de repetición para cada alelo deben ser los mismos. Por ejemplo, en el locus D3S1358 (ver Figura 1), si la muestra obtenida tiene un perfil STR en ese locus de 7,5, entonces el sospechoso B ya está excluido para que coincida con la muestra obtenida. Si los perfiles de alelos coinciden, entonces la probabilidad se calcula dependiendo de la frecuencia del alelo para la ubicación particular. Esto implica que el sospechoso no es automáticamente la fuente definitiva de la muestra cuando los perfiles STR coinciden.
También se han establecido bases de datos para ayudar en el proceso de investigación, como el Sistema de Índice de ADN Combinado (CODIS), mantenido por el FBI de EE. UU.
PCR EN EL FLUJO DE TRABAJO DE PERFILADO STR
1. Las investigaciones comienzan con la recolección de materiales biológicos como dientes, cabello, huesos y fluidos de la escena del crimen.
2. Luego, las muestras se transfieren al laboratorio forense para su posterior procesamiento, donde se extrae el ADN de las muestras (~ 1 ng de muestra es suficiente para la PCR).
3. Los loci STR específicos se dirigen y amplifican mediante PCR. Los fragmentos de PCR se analizan adicionalmente mediante secuenciación o electroforesis.
4. A continuación, se generan los perfiles STR y, si están disponibles, se verifican con perfiles o bases de datos sospechosos.
El perfilado STR requiere termocicladores robustos para ayudar en el proceso de investigación. Se necesitan resultados confiables de la experimentación en laboratorio húmedo para ayudar a los departamentos de policía y fiscales en sus informes. Esco Lifesciences ofrece termocicladores con excelentes velocidades de calentamiento y enfriamiento, temperatura precisa y uniforme para garantizar perfiles STR confiables.